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                          谷胱甘肽ELISA測定實驗完整攻略

                        1. 發布日期:2022-07-05      瀏覽次數:176
                          • 簡介:

                            GSH的測定實驗可以用于:(1)檢測藥品中GSH的存在以及含量;(2)GSH具有廣譜解毒作用,不僅可用于藥物,更可作為功能性食品的基料,在延緩衰老、增強免疫力、抗腫瘤等功能性食品廣泛應用


                            一、材料準備


                            1.  包被液:0.05 mol/l(pH9.6)碳酸鹽緩沖液:Na2CO3 0.159 g,NaHCO3 0.294 g,用蒸餾水溶解后,定容至100 ml。


                            2.  PBS-T洗滌液:0.01mol/ pH7.4磷酸鹽-氯化鈉緩沖液:NaCl 8.0 g,KH2PO4 0.2 g,Na2HPO4·12H2O 2.9 g,KCl 0.2 g,吐溫-20 0.5 ml,用蒸餾水溶解后,定容至1000 ml。


                            3.  底物溶液3,3’,5,5‘-四甲基聯苯胺(TMB)貯存液及應用液:

                            (1)0.1 mol/l pH6.8 PBS:Na2HPO4·12H2O 1.09 g,NaH2PO4·H2O 6.05 g,蒸餾水溶解后定容至500 ml,4℃保存備用。

                            (2)TMB貯備液:TMB 60 mg 溶于10 ml 二甲基亞砜(DMSO)中4℃保存備用。

                            (3)TMB應用液:臨用前取0.1 mol/l pH6.0 PBS 10 ml,TMB貯備液100 ul,30%H2O2 15 ul 混勻即可。


                            二、實驗步驟


                            1.  抗體包被

                            (1)抗體用包被液稀釋至20 ug/ml,加入聚苯乙烯反應板中每孔100 ul,加蓋后放4℃過夜。

                            (2)傾去孔內液體,加入洗滌液后靜置3 min,傾盡洗滌液,重復洗滌3次。

                            (3)將反應板口在吸水紙上,以除盡液體。


                            2.  封閉:每孔加入200 ul封閉液,37℃孵育60 min,然后洗滌3次。


                            3.  加入待測血清,37℃溫育1~2 h,洗滌3次。用稀釋液作對照孔,標準曲線的制備是用不容稀釋度的純GST-π。


                            4.  加酶標抗體:按要求稀釋抗GST-π-IgG-HRP,每孔100 ul,37℃溫育1 h,然后洗滌5次,扣在吸水紙上吸干水分。


                            5.  顯色:加入TMB應用液,置室溫反應15~30 min,加入50 ul 2 mol/l H2SO4,穩定3~5 min,即可比色。


                            6.  比色:用酶標儀,以PBS-T孔為對照,波長450 nm,測各孔光吸收度(A),查標準曲線,即可測得GST-π含量。


                            參考文獻:


                            1.【文獻標題】Tissue engineered artificial liver model based on viscoelastic hyaluronan-collagen hydrogel and the effect of EGCG intervention on ALD

                            2.【文獻標題】Analysis of the effect of probucol-mecobalamin tablets combination on oxidative stress in patients with diabetic peripheral neuropathy 



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